CAR-T 细胞疗法自 2017 年首次获得 FDA 批准以来，彻底改变了血液肿瘤的治疗格局，但基于 ex vivo(体外制备)的传统模式始终面临着难以逾越的产业化鸿沟。个体化生产流程导致治疗成本高达数十万美元，患者等待时间长达数周，且复杂的操作工艺使其仅能覆盖少数中心城市的患者。

in vivo(体内)CAR-T 细胞疗法的出现正是为了突破这些瓶颈，其核心优势在于无需体外分离 T 细胞，有望实现现货型(off-the-shelf)的治疗模式，且大幅降低生产成本，以及可避免清淋处理，提高治疗安全性。

近两年已成为 in vivo CAR-T 技术从概念验证迈向临床实践的关键转折点。当下全球已有超过 70 款 in vivo CAR-T 管线进入临床前或临床早期开发阶段，预计 2025 年底管线数量将突破 100 个。

▲ in vivo CAR-T 细胞疗法管线年增长趋势

在 in vivo CAR-T 技术路线中，递送系统的选择至关重要。目前主要分为病毒载体(以慢病毒为主)和非病毒载体(以 LNP 为主)两类。其中 mRNA 与脂质纳米颗粒(LNP)的组合技术正逐渐成为非病毒递送系统的主流选择。与慢病毒等病毒载体相比，mRNA-LNP 组合具有更高的安全性、灵活性和更快的设计迭代速度等特点，将避免病毒载体可能带来的插入突变风险和长期毒性问题。

今年，业内发生了几起重大收购案，点燃了业内人士对 in vivo CAR-T 的关注。其中，最引人注目的是艾伯维以 21 亿美元高价收购 Capstan Therapeutics，一举拿下其基于 LNP 的 mRNA 递送技术平台。此外，阿斯利康以 10 亿美元重金收购 EsoBiotec，囊获其工程纳米抗体慢病毒(ENaBL)平台;吉利德旗下 Kite 公司以 3.5 亿美元将 Interius BioTherapeutics 收购，囊获其球首个进入人体临床试验的以慢病毒载体递送 CAR 转基因 in vivo CAR-T 细胞疗法。

值得注意的是，艾伯维对 Capstan 的估值是吉利德对 Interius 估值的 6 倍，这一差距或许正揭示了行业对 mRNA-LNP 和慢病毒载体路线对于 in vivo CAR-T 的价值的深刻认知。

▲ 基于 mRNA 的 CAR-T 免疫疗法的原理及非病毒 CAR-T 细胞的产生

回顾 mRNA 技术的发展历程，从早期因稳定性差、免疫原性高而被质疑，到 2020 年新冠疫苗的成功商业化，其产业化应用已从传染病疫苗扩展到基因疗法、蛋白替代疗法和再生医学等多个领域。然而，mRNA 技术要在抗感染疫苗之外的更广泛治疗场景中实现规模化应用，仍面临三大核心瓶颈：递送效率低、生产工艺与质控难度大、表达时间短。

随着 in vivo CAR-T 赛道的升温，mRNA 技术能否借此东风突破自身产业化瓶颈?这不仅关乎两种前沿技术的协同发展，更将决定下一代细胞疗法能否真正实现「治疗民主化」的愿景——让先进细胞疗法摆脱对高端医疗中心的依赖，惠及更多患者群体。

产业化挑战与关键突破点

1、递送系统改造：突破肝脏富集局限

传统 LNP 静脉注射后约 90% 富集于肝脏，靶细胞递送效率不足 5%，严重限制其应用。近年来，行业通过表面修饰、脂质组成优化等多维度创新，逐步构建起靶向递送技术体系。

2018 年，mRNA 技术奠基人、宾夕法尼亚大学 Drew Weissman 教授团队在 Journal of Controlled Release 发表论文，率先提出将抗体片段融合到 LNP 表面的策略，通过化学偶联法(SATA-马来酰亚胺)将靶向血管内皮标志物 PECAM-1 的抗体修饰至 LNP 表面，实现肺部特异性 mRNA 递送。

2022 年，优卡迪在 Journal of Controlled Release 发表论文，阐述了表面负载 CD3 抗体修饰的 LNP 载体技术，通过 CD3 抗体介导靶向 T 细胞，在静脉注射后实现体内生成 IL-6 敲低的 CD19-CAR-T 细胞，为 in vivo CAR-T 的临床应用提供了新思路。

2022 年，CAR-T 之父 Carl June、Drew Weissman 和 Jonathan Epstein 等共同创立了 Capstan Therapeutics，进一步优化了 LNP 表面修饰策略，开发了 tLNP(靶向 LNP)用于 in vivo CAR-T 细胞疗法。其 tLNP 递送系统通过与抗体或抗体片段偶联，实现对特定细胞类型的靶向递送。紧接着，Capstan 将 tLNP 技术应用于其核心管线，在临床前研究中展现出显著效果。

2025 年 6 月，Capstan 公司及宾夕法尼亚大学的研究人员在 Science 发表论文，显示开发了一种新型可电离脂质 L828，并优化了 LNP 配方降低肝脏积累。其通过在 tLNP 表面偶联 anti-CD5 抗体，进一步实现对脾脏中免疫细胞的特异性靶向。当月，Capstan 启动 CPTX2309 的 1 期临床试验，用于治疗 B 细胞介导的自身免疫疾病。随后不到半个月，Capstan 即被高价收购，凸显行业对 mRNA-LNP 路线的认可。

在企业推动临床转化的同时，学术界在脂质组成创新上取得突破。2025 年 4 月，上海交通大学霍云龙教授团队在 Nature Communications 发表文章，通过新型 LNP 递送 mRNA 生成瞬时 CAR-T 细胞，将胆固醇替换为等量的β-谷固醇以优化 LNP 脂质组成，显著提高 mRNA 表达效率，同时在 LNP 表面偶联 CD5 抗体，使其具备特异性靶向 T 细胞的能力。在肺纤维化模型中，单次给药即可实现活化成纤维细胞的特异性清除，促进肺泡上皮再生，年轻和老年小鼠的纤维化区域显著减小。值得注意的是，该疗法采用瞬时表达策略，CAR-T 细胞在完成纤维化逆转后自然消退，避免了长期存在的 CAR-T 细胞可能导致的脱靶风险。

当前行业正从单一靶向策略向多维度精准递送发展，包括优化 LNP 脂质组成、SORT-LNP 技术、可裂解脱 PEG 的 LNP 减少「加速血液清除」效应等。

2、生产工艺的规模化升级与质控体系建设

将 mRNA-LNP 生产工艺从实验室推向商业化，面临着一致性与稳定性的严峻挑战。该过程涵盖质粒构建、体外转录(IVT)、LNP 包封、纯化、灌装等多个复杂环节，其中 LNP 的包封率、粒径分布、稳定性等关键质量属性(CQA)的控制仍是行业难题。针对这些挑战，行业在工艺标准化、连续化生产和质量控制方面取得了一些共识。

2023 年， BioPhorum 联盟发布 mRNA-LNP 产品的行业共识，为其开发与生产提供 CQA 指导。下表汇总了核心 CQA 内容，供大家参考。

▲ mRNA-LNP 产品 CQA 清单

尽管 CQA 标准已清晰，但当前生产工艺仍存在产量低、质量波动大等问题，难以满足 in vivo CAR-T 疗法的商业化需求——mRNA 完整性控制依旧存在困难，与此同时难以精准控制 LNP 的包封率、粒径为之后 tLNP 的偶联制备增加挑战。为满足 mRNA-LNP 工艺开发与生产的 CQA 要求，Cytiva Fast Trak 推出针对性的平台化工艺解决方案，提供了从质粒 DNA 生产、IVT 反应、mRNA 纯化到 LNP 包封、纯化的端到端工艺解决方案。

▲ Cytiva Fast Trak-mRNA 工艺路线

在工艺开发阶段即融入质量源于设计(QbD)理念，通过科学的实验设计(DOE)方法识别关键工艺参数(CPP)与 CQA 的关联，建立全面的过程控制策略，保障 mRNA 完整性超 85%，批产量高达 10 g/L 的 IVT 小试与放大工艺，且在不同批次中展现出高度一致性的批间稳定性。

在质控环节，结合 Oligo(dT) 亲和层析、切向流过滤(TFF)等手段获得符合临床要求的高纯度 mRNA 原液，同时通过优化 IVT 工艺参数与杂质纯化流程(如去除 dsRNA)，有效降低 mRNA-LNP 产品的免疫原性。此外，Cytiva Fast Trak 高效检测平台能在一天内完成包封率、LNP 粒径分布、LNP 中 mRNA 完整性和 mRNA-LNP 空壳率等关键指标检测，助力和加速工艺开发。

在 mRNA-LNP 生产阶段，Cytiva Fast Trak 基于可放大的平台化工艺解决方案，助力客户实现高产量、高质量以及高稳健的 GMP 生产。项目交付结果显示，六批次 mRNA 包封平均 PDI 小于 0.05，并在包封率、空壳率以及粒径分布上保持高度一致性。

▲ Cytiva Fast Trak 的 mRNA-LNP 平台-优异的关键质量属性

这一系统性平台化化工艺解决方案不仅有效解决了 mRNA-LNP 生产中的关键瓶颈，还保障了产品质量，为监管审批提供了完整的数据支持，也为 in vivo CAR-T 的产业化提供了可靠的技术支撑。

3、mRNA 表达的持久性

mRNA 表达的瞬时性是一把双刃剑，一方面避免了基因组整合风险，另一方面也限制了 CAR-T 细胞的持久性。目前提升表达持久性策略包括优化 mRNA 序列——含 5'UTR、3'UTR 和 Poly(A) 尾的修饰，重复给药方案等。

这种「短暂性」在不同疾病治疗中各有利弊。对于肿瘤治疗，CAR 表达时间过短可能导致疗效不足;然而，对于自身免疫疾病，瞬时表达恰恰成为一种优势，使其能够实现「免疫重置」而非对免疫细胞进行长期或永久性清除。

正如博生吉创始人、董事长兼 CEO 杨林教授所言，「mRNA CAR-T 存活周期仅数天至数周，远低于慢病毒载体的长期甚至终身表达，虽可能影响肿瘤根治，却适配自免疾病『免疫重置』而非『持久杀伤』的需求。」

结语

mRNA 与 CAR-T 的结合，代表了细胞治疗领域的一次重大范式转变。mRNA 的快速设计能力完美匹配 CAR 分子迭代优化的需求，而 in vivo 模式为 mRNA 技术提供了突破递送壁垒的临床场景。

随着众多 MNC 的深度布局，行业正从分散的技术探索阶段迈向系统的产业化攻坚阶段。对于志在进入 in vivo CAR-T 这一领域的创新药企而言，能否快速建立成熟、稳定且可放大的生产工艺体系，已成为决定研发进度乃至成败的关键。Cytiva Fast Trak 等平台提供的工艺开发与生产解决方案，正通过其在工艺稳定性、可放大性与质控体系三大核心环节积累的优势，为企业提供关键支持，帮助应对从序列到 IND 申报的全链条挑战，为更快实现治疗方案的临床转化与产业化提供坚实保障。

可以预见，当高效合规的工艺为技术创新铺平道路，细胞治疗从「个体化定制」 向「通用型药品」的步伐将大大加快，治疗民主化的愿景也将随之加速实现。